北京SCILOGEX賽洛捷克PCR儀維修電話

北京SCILOGEX賽洛捷克PCR儀TC1000-👍G梯度PCR擴增儀 基因擴增儀服務熱線:400-605-3352, 010-6883 0910。

賽洛捷克 PCR儀 TC1000-G 梯度PCR擴增儀 基因擴增儀:

TC1000-G 梯度PCR擴增儀

TC1000-G梯度PCR擴增儀具有升降溫快速,控溫度高,彩色觸屏控制等特點,廣泛應用于分子生物學,臨床診斷,刑事偵查,疾病研究等。其梯度模塊,擁有42℃的*寬梯度✨功能,可實現不同退火溫度的*控制,僅一次實驗就能確定特定體系相應的退火溫度。從而可在短時間內對PCR實驗進行優化,提高PCR科研效率。

梯度PCR

性能指標:

? 高精度溫度控制,整個體系溫度均一性好

? 快速的升降溫速度,程度降低PCR的非特異性擴增的發生率

? 彩色觸屏,參數設定靈活,完美用戶體驗

?超寬42℃的梯度模塊可設定不同的退火溫度,一次實驗即可優化PCR實驗,提高科研效率

? 可調熱蓋高度,模塊兼容性強,適合多種PCR反應管

? 超靜音體系,外形小巧,性價比高。

反應條件選擇

PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。

溫度與時間的設置:基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法,雙鏈DNA在90~95℃變性,𝓀再迅速冷卻至40~60℃,引物退火并結合到靶序列上,然后🍃快速升溫至70~75℃,在Taq DNA聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100~300bp時)可采用二溫度點法,除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一,一般采用94℃變性,65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的 催化活性)。

①變性溫度與時間:變性溫度低,解鏈不完全是導致PCR失敗的*主要原因。一般情況下,93℃~94℃min🐠足以使模板DNA變性,若低于93℃則需延長時間,但溫度不能過高,因為高溫環境對酶的活性有影響。此步若不能使靶基因模板或PCR產物完全變性,就會導致PCR失敗。

②退火(復性)溫度與時間:退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性后溫度快速冷卻至40℃~60℃,可使引物和模板發生結合。由于模板DNA比引物復雜得多,引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高于模板 互補鏈之間的碰撞。 退火溫度與時間,取決于引物的長度、 堿基組成及其濃度,還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸,G+C含量約50%的引物,55℃為選擇*適 退火溫度的起點較為理想。引物𒀰的 復性溫度可通過以下公式幫助選擇合適的溫度:

Tm值(解鏈溫度)=4(G+C)+2(A+T)

復性溫度=Tm值-(5~10℃)

在Tm值允許范圍內, 選擇較高的復性溫度可大🦩大減少引物和模板間的非特異性結合, 提高PCR反應的特異性。復性時間一般為30~60sec,足以使引物與模板之間完全結合。

③延伸溫度與時間:Taq DNA聚合酶的生物學活性:

70~80℃ 150核苷酸/S/酶分子

70℃ 60核苷酸/S/酶分子

55℃ 24核苷酸/S/酶分子

高于90℃時, DNA合成幾乎不能進行。

PCR反應的延伸溫度一般選擇在70~75℃之間,常用溫度為72℃,過高的延伸溫度不利于引物和模板的結合。PCR延伸反應的時間,可根據待擴增片段的長度而定,一般1Kb以內的DNA片段,延伸時間1min是足夠的。3~4kb的靶序列需ඣ3~4min;擴增10Kb需延伸至15min。延伸進間過長會導致非特異性擴增帶的出現。對低濃度模板的擴增,延伸時間要稍長些。

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